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HRP标记抗体-简易过碘酸钠法

来源:admin  浏览量:  发布时间:2018-04-28 14:42:47

1、溶液配制:

0.06M NaIO4:称取0.128g NaIO4溶于10mL去离子水中

0.16M乙二醇:取乙二醇9μL,加屈臣氏蒸馏水至1mL,即得。

   0.05M CB Buffer:取3.18g Na2CO3,5.88g NaHCO3,溶于2L屈臣氏蒸馏水

   4mg/mL NaBH4:称取40mg NaBH4,溶于10mL去离子水中

2、方法步骤:

(1) 称取2mgHRP溶解于0.5ml蒸馏水中,溶液为棕黄色。

(2) 于上液中加入0.4ml新配的0.06M NaIO4溶液,立刻变为灰绿色,4℃避光

搅拌30分钟。

(3)  加入0.16mol/L乙二醇0.4mL,静置30min,溶液缓慢变回棕黄色,RT,

加入抗体1ml  4mg,CB,4℃透析过夜。

(4)  再加入4mg/mL NaIO4  0.1mL,加入后溶液有气泡产生。室温静置2h

(5)  50%饱和硫酸铵盐析一次,12000rpm,4℃离心30min。沉淀用5mL

0.01mol/L PB重悬。

(6) 将上述液装入透析袋中,对0.15M pH7.4 PBS 置4℃冰箱透析过夜,再换用0.01M pH7.4的PBS透析两次。浓缩后加入等量甘油置负20℃保存。

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